我最近在跑western，用的membrane、抗体都很固定，基本上也都OK，只是在少数时候 会发现整片膜发光的情况。 由於我是用UVP的CCD照的，如果是压底片的话，应该就是所谓的「压海苔」了！ HTTP://MYHOME.ETHOME.COM.TW/liar2000/080912_p-ERK,ERK.png HTTP://MYHOME.ETHOME.COM.TW/liar2000/080912_p-ERK,ERK_W.png 上面是PVDF 0.45um，下面是0.22um，转印时两张垫一起，看有没有转过头。 我一转印完就先剪成图中的4小张，再丢blocking一小时，然後同一个位置的 0.45um和0.22um的PVDF在一抗时就放同一袋，室温摇一个半小时。 之後WASH和二抗就大家一起摇。 从照片来看，上面的0.45um应该问题不大，但下面的0.22um却不晓得为什麽，就是有不 均匀的亮。 HTTP://MYHOME.ETHOME.COM.TW/liar2000/080923_ECL2.png 跑三种单株抗体，除了一抗不一样有分开外，其余步骤包括blocking和wash等都一起做。 这一次全部是PVDF 0.45um，blocking,一抗二抗都70 min。 问题就是最下面那两张，根本是破表了。 HTTP://MYHOME.ETHOME.COM.TW/liar2000/081021_beta-ACTIN.png HTTP://MYHOME.ETHOME.COM.TW/liar2000/081021_beta-ACTIN_W.png 这一次是做stripping後重新blocking(over night)开始，结果也是有一片 区域爆亮。 由於同一张照片中，blocking是大家一起，应该不会有问题。 而一抗我也用很多次，有的甚至是reused的，所以专一性也没问题。 可是也不应该是wash不乾净，我拿回去重洗再照，还是同一个区域亮。 请问我的问题是出在哪里，应该要怎麽修正呢？ -- 太初有道，道与耶和华同在，道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。 万物乃藉祂所造，凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头， 这生命就是人的光。光照在黑暗里，黑暗却不接受光。 吾辈乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦诱惑，回归黑暗。 我不断地徘徊於光明与黑暗之间，从被造之日至今，又自今直到那审判之日的来临。 --

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