作者sweetE (sweetE)
看板Biotech
标题[求救] western problem
时间Sat Oct 11 14:45:12 2008
我想请问
在压片的时候 第一次我压了三分钟
经过自动洗片机 在洗片的同时 我又压了一个五分钟的片子
第一片三分钟的 洗出来 有东西
但是比我以前压的signal弱(including GAPDH 这种BAND应该不弱的蛋白)
第二片 五分钟的 洗出来 完全没东西
我想~冷光应该不会DECAY的那麻快吧....
像出现这样的现象 问题应该出在哪里呢?
我唯一想到的问题 只有二抗
因为早上同一批membrane 我用上礼拜用过的一抗hy
二抗是新配的 (both in 5% skim milk)
不过我想我的一抗牛奶可能坏掉
但我还是试试看(因为抗体有限) 结果是压不出来
然後 我就把membrane用TBST wash了一阵子之後
重新配一抗(这次用3%BSA配，比较不会坏掉) and重hy一次
不过二抗 我是用早上配的那个二抗(in milk)
结果就出现我最一开始说的那个状况~
虽然说 早上也是hy了这个二抗 而HRP也一直在上面
应该是不会有"用光"的情形
因为加入了ECL 只要SUBSTRATE存在，那有HRP就可以work，就有冷光产生
所以 我也说不上来到底是不是因为二抗~
麻烦各位大大，替我看一下我的问题在哪里~
谢谢你们!!!!
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◆ From: 61.217.147.117
1F：推 bb89233:我觉得是ECL有问题 10/11 21:16
2F：推 lail:可能是ECL用太久了,试着跟别实验室借看看吧~ 10/11 21:20
3F：→ sweetE:但是这瓶ECL上礼拜还压出来过......好奇怪啊!!! 10/12 14:21
4F：推 scorpiuswu:前两个星期也遇过这样的事 换新ECL就好了 10/14 16:32