※ 引述《charlielg (chi)》之铭言： : 1.大肠杆菌是目前表现外源基因最常用的系统,然而大肠杆菌表现系统常遇到 : inclusion body的问题,他是一种不可溶物质,这里所谓不可溶是指不可溶於水 : 还是不可溶於任何溶液? Insoluble ->无法溶在lysis buffer里,但可以用高浓度urea使其溶解. : 2.inclusion body是因为构型摺叠不正确而使其变成一种不可溶物质,因而造成活 : 性不佳,那是否当inclusion body变成可溶性也就代表活性会提升呢? 其实refolding这个步骤,如果可以用其他方法表现,就用其他方法,要从refoldimg下手 做出有活性的蛋白,我觉得很困难,尤其一些分子大的.在refolding之後是否正确, 而且损耗也很多(会沉淀),都是个"?",如果可以选择其他方法,就不要用E. coli表现, 太大且有太多Cys的蛋白质!! : 3.利用大肠杆菌来表现真核基因时,所表现出来的蛋白质会跟native form会差很多 : 吗?如果会,那为何在很多实验中还是要利用此系统呢?除了此系统便宜培养容易 : 及了解较深入之外,有其他考虑因素吗? 其实有时候只是表现片段蛋白E. coli就是个好选择,又快又容易做. 用E coli大概就是快吧! 还有任何人都可以做,不像cell cultural还需要担心操作不当, 出现其他问题. 但如果是整段蛋白,还是选择有醣基化且可以帮助蛋白正确folding的系统较好. : 4.此系统最常被用来表现哪一类的外来基因(哪一类的蛋白质)? 这个问题,不知道该怎麽回答 @@ 很多种蛋白都有在E coli表现的纪录吧@@ 目前做过几种蛋白(human),如果是整段的蛋白整个要在E. coli里表现且Soluble实在太难, 但如果只是做一小段,通常是可以成功表现且Soluble,通常在预测时disulfide bond太多就 不会尝试用E. coli,直接做到Insect cell表现. --

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