作者miniprep (小准备！)
看板Biotech
标题[求救] RE Digestion
时间Sun Oct 5 22:35:18 2008
由於上周做了一次ligation之後盘子也长了几个colony
就快快乐乐的养了菌，抽了DNA(geneaid的kit)，就直接用我接进去的site
(AgeI-insert-BamHI)，之前这个组合拿来切Vector跟Insert都很顺利
可是拿来切construct的时候，就发生了意想不到的状况。
切完的结果非常诡异，很像是gel不小心用水配的结果(可是ladder是完整的，胶没错)
每一个well下面都没有band，而是很亮的类似comet tail的东西。(跟sono很像= =)
怀疑是colony或RE的问题就分开来切，但是结果single digestion结果都合理。
也都出现single band，长度也接近(约8.3kb)。
这样的状况还有那些可能呢？
目前已知：
1. RE没问题
2. DNA，或许，没问题。
那剩下的可能是？
3. methylation interference?
4. 我手残？(虽然不想承认，但是先怀疑自己比较好，可是我repeat两次了)
5. 换一组RE来切？
6. 直接拿去transient transfect看reporter gene算了？
拜托帮我解个惑吧...Orz
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.135.72.79
1F：推 senlin:送定序最准 10/06 04:31
2F：推 blence:假设没有其他常见的出错下,看你选的RE会觉得明显是问题所在 10/06 04:52
3F：→ blence:为了double digest屈就buffer,又用了常有star activity的RE 10/06 04:54