作者greenmoon00 (苍天之月)
站内Biotech
标题Re: [方法] 一样想问萃取蛋白质的方法
时间Sat Oct 4 19:59:37 2008
※ 引述《amit (no)》之铭言：
: 想请问各位 如果要收很多的时间点
: 就要先把细胞先收集起来
: 我之前的方法是把盘子整个冻在-80
: 但是拿出来加lysis buffer的时候 体积会多出一倍多
: 所以参考了前面几篇的方法 用PBS刮细胞再离心
: 可是我用1500rpm 离心十分钟後
: 发现用tip吸supernatant 会有很多悬浮的细胞耶!!!!
: 感觉loss很多细胞>"< 而且我的细胞是primary culture原本就不多了
: 是不是我离心的转速不对呢???
说我的方法
10公分盘 medium吸掉 (如果有悬浮或需要用的死细胞就收到15ML TUBE)
1ML PBS(可冰可不冰) wash 吸至 15ML TUBE
再加1ML PBS去刮 刮下来一样收 TUBE
最後用1ML PBS wash一下盘子 收至TUBE
离心 1200rpm 5min 通常就OK了
如果这样不行~那就只好把刮的1ML用eppendof离心
但这样可能就要舍弃medium里的细胞了
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.3