作者bolly (bolly)
看板Biotech
标题Re: [求救] competent cell制作
时间Wed Oct 1 01:15:21 2008
我今天又试了一次 在制作过程我都尽量在冰上处理
我也是用离心管操作 所以置於冰上的步骤也都是整支插进冰里
最後一步分装好之後 我拿了一管直接涂在无抗生素的菌盘上
在拿另一管作transform
我的transform步骤是加入1-2ul DNA到0.2ml competent cell
置冰上二十分钟 再heat-shock 42度C 2min
接着在置於冰上5-10 min 因为是新鲜的competent cell
所以直接涂菌盘 没有作修复的动作
我刚看了一下菌盘长的情况
直接涂菌盘的菌长得满满的 表示我制作过程应该是OK的
菌都还活着
但是有加DNA作transform的菌都没长
我猜可能的原因是氯化钙有问题 没有成功的在菌上打洞
或着是我的transform还需要作修正
顺带问一下 前面有几位提到离心机的rpm
我想如果能直接说g值会不会比较好 因为rpm会随roter改变
直接说g值我会比较能抓条件 谢谢大家的意见
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.202.50
1F：推 qumai:我们实验室是用1000g离心 10/01 01:44
2F：推 tsubasawolfy:为何新鲜的就不做recover呢@@? recover的用意不是要 10/01 08:01
3F：→ tsubasawolfy:让他先制造出足够的anti-antibotic enzyme嘛@@? 10/01 08:02
4F：推 williamyang:我觉得recovery很重要.以前有忘记做.後来结果超烂... 10/01 14:39
5F：→ bolly:因为上次跟学姐作出的那批heat-shock後直接涂盘 结果爆盘 10/01 14:49
6F：推 liner76:试试heat-shock 90sec 後,致冰上2min试试看吧! 10/01 18:28
7F：→ liner76:後面在接悬浮培养1hr...在图plate 10/01 18:29
8F：→ bolly:这次换了新的氯化钙 再试试看 10/01 20:25
9F：→ leftt:还是要recover吧 爆盘的问题可用稀释来解决啊 10/01 23:47