作者blueashin (tRoMboNe pLaYer)
看板Biotech
标题Re: [方法] ligation的问题...
时间Mon Sep 15 01:48:54 2008
※ 引述《dreamysky (新绿园说不关了)》之铭言：
: 我有一段要接进去的gene 大小约1K
: 可是他的前後接位都是EcoR1
: vector 我有加CIAP 作用 37度 30 min
: ligation volume控制在20 ul
: mol为 Vector: 0.7 pmol
: gene : 6 pmol
: 2 unit T4 ligase (genemark)
: 可是接不进去...
: 有请先进帮帮我...
: 我已经失败两周了...
: PLEASE
1.基本上
有人说 vector : insert = 1:3
这可能要测过DNA浓度来判断,
但是一般而言,ligation前,我会跑一张电泳,
确定vector以及insert的亮度,
然後再决定他们的比例,
2.
ligation能不能成功,有很多关键,
Restriction enzyme 有没有切动很重要,
而RE有没有切动,又与plasmid乾不乾净有关系,
所以我想你如果要找出问题的话,必须step by step
每一步都做好,不然要成功,还有段距离呢..
加油^^
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◆ From: 218.173.205.20
1F：推 dreamysky:THX~ 09/15 13:53