作者hsin1106 (过於喧嚣的孤独)
看板Biotech
标题Re: [求救] 抽DNA跟跑电泳的问题
时间Thu Sep 11 19:36:00 2008
※ 引述《yaliu (雅)》之铭言：
: ※ 引述《hsin1106 (过於喧嚣的孤独)》之铭言：
: : 最近刚进实验室开始做实验
: : 在抽DNA跑agarose gel时碰到了几个问题
: : 1.我的gel照UV的时候 顶端会整个偏白色
: : 比较上面的band会被盖过去 不容易判读
: 会不会buffer太脏，或者gel配太久了？？
gel都是 现做的 1%
buffer的话是公用的
: 如果片段太大可以降低agarose ％数
: : 2.用BamH和NdeI切我的plasmid时
: : 我的比例是 两种酵素 各加1μl
: : DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer
: : DNA量比较多的话就等比例增加
: : 之後再37度下反应两个小时
: : 可是跑完电泳 甚麽都看不到
: : (marker跟未切拿来当control的都有band)
: 各loading的量？
: 未切的和已切的各loading多少？
通常我都会loading一样的量
loading过10μl跟20μl两个量
: : 3.我的plasmid 是pET-15b
: : 通常在菌液OD=1.5上下时用VIOGENE的kit抽
: : 抽出来的DNA稀释10倍测260nm大概都在0.03~0.05之间
: : 这样的量是不是偏少?? 是的话 有哪些可能会影响??
: 浓度应该用核酸测定仪测吧
: 不然可以对照marker的量
: 记忆上以前测过1mL的菌液萃取，好像顶多0.6~0.9 ug/ul吧
: 好像很难超过 1ug/ul (不晓得有没有记错.....)
: 我是用kit抽的
: 还有plasmid的量跟copy number应该有关吧
我算了一下我抽的大概只有0.02ug/ul
这样应该超少的吧...orz
那copy number该怎麽查相关资讯
: : 麻烦板上的各位 提供可能的原因
: : 或者有哪些资料可以参考的
: : 让我可以试着排除问题
: : 不然实验一整个没办法继续下去
: : 先谢谢各位了
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.177.142
1F：推 milkpa:pBR322 ori，中间偏低，约10～20copy number 09/11 20:47
2F：推 yaliu:基本上切过的可以全load啦～不过你template其实加的蛮多的耶 09/11 23:15
3F：→ yaliu:问一下，你没切过的跑电泳亮吗？ 09/11 23:16
4F：→ yaliu:如果本身plasmid浓度低的话，做酵素切割template在提高 09/11 23:17
5F：推 yaliu:另外，如果你有发现你的plasmid有越抽越少的趋势，检查一下 09/11 23:22
6F：→ yaliu:你的抗生素还在不在... 09/11 23:23
7F：→ hsin1106:没切过的跑电泳会亮...@@ 09/12 10:59
8F：→ feng760804:胶最好不要现做现用喔 最好事先放进烘箱 因为胶太热 09/13 23:47
9F：→ feng760804:会导致EtBr的降解喔(老板说的) 09/13 23:48