作者crement (cometoseeme)
看板Biotech
标题Re: [求救] 点状转渍
时间Thu Sep 4 22:17:34 2008
※ 引述《REIDO (医工所昏迷中)》之铭言:
: ※ 引述《kakaman (日子过的真快阿)》之铭言:
: : 接着就像western一样了
: : 我load的蛋白是total protein
: : 我知道除非抗体很好 不然用这方法实在不怎麽恰当
: 我想请教一下,为什麽抗体要很好才有办法呢?
: 我之前也有想过,假设只测一个protein。
: 之前跑过WESTERN确认抗体的专一性,目标分子量也正确,而且PVDF的capacity也够,
: 那为什麽不一开始就直接把sample加到PVDF或NC上面,然後从blocking开始?
: 照上面的说法,点状转渍应该有缺陷,请问是什麽呢?
因为现在作WB,除了染想要染的蛋白,
通常还要染其他的东西,
像是loading control用的actin or GADPH。
这个时候就是不行的。
如果你的抗体不好,会认超过一个蛋白(这种事情常发生),
一般的PAGE你可以用分子量分开,
DOT BLOT就不行了。
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过去的来不及追忆 现在的赶不及接受
得到的不懂得珍惜 失去的无法能忘记
这就是生活吗?!
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◆ From: 125.230.66.18