作者dudu0623 (猫精)
看板Biotech
标题[求救] co-ip 有许多杂band
时间Wed Aug 20 16:21:09 2008
我所要作的target protein位置约为52 kDa，与heavy chain的位置很近，
所以我使用去除heavy chain 的mouse和 rabbit的HRP 二抗(腾达行 公司)作WB的部分，
在经过抗体测试後，抗体的确是辨认 light chain 28 kDa 的位置，
而heavy chain的讯号很微弱。
但是问题来了，当我加入cell lysate後，用同样的protocol作，
连pre-immune的 IgG部分，从55 kDa的位置以下都有许多杂band，当然，
我的实验组也产生同样的结果，完全没有办法辨识是否有抓到我的target protein。
在这边我附上我的实验方式:
protein conc 约0.5 mg
抗体 conc 1μg
RIPA buffer
50 mM tris-HCL
0.1% NP-40
150mM NaCl
2mM DTT
1% triton X-100
ip 培养时间 1 hr 4度C
清洗次数 5次
WB 的一抗稀释倍数 1000x
希望有作过IP 的前辈，给我帮助吧!!!!^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.81.124
1F：推 ligase:是不是protein degradation?加一些proteinase inhibitor 08/21 00:56
2F：→ ligase:在lysis buffer内吧,必要时连wash buffer也要加 08/21 00:56
3F：→ dudu0623:谢谢~~我会试试看 08/21 20:56