作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
标题[求救] Plamid 泡过 buffer在跑胶变成smear...
时间Tue Aug 19 12:30:33 2008
我用NEB的enzyme EcoRI 和 SpeI 做double digestion
切载体欲切下1KB (NEB buffer 2)
结果有切下预期的band
然而载体却像是变成碎片, 原先约8k 的plasmid 变成200bp~ 5k 的smear
即使我换了NEB 的表, double digestion 建议使用的 NEB buffer EcoRI
仍然是一样的结果
後来发现:
1. 把 DNA (来自mini prepare)
泡在 1X Buffer EcoRI, 37度C, 1hr, 跑胶, DNA 就变成 smear
(不加enzyme)
2. 如果 DNA 加水, 37度C, 1hr, 跑胶, 还是能看到能看到清楚的两个band
(看起来band 像比较正常的 plasmid supercoild 之band)
所以我猜测我使用的buffer 会使 plasmid 被切碎
总之DNA 烂烂的想挖胶都看不见明显之band
或是预期之band 微弱, 取而代之的是smear 一大片
不知道有没有人遇过类似的情况?
可能是什麽原因?
感谢任何建议或意见
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◆ From: 140.109.55.238
1F：推 sGoat:你是vortex还是gentily mix反应液? 08/19 12:43
2F：推 davideason:我觉得质体没差,倒是该换别家lab的buffer来看看结果 08/19 15:53
3F：推 huhu126:换新的10X buffer再切, buffer坏了吧 08/19 19:43
4F：推 yaliu:vector的主体应该还见的到吧，我有时候切也会有这样拖曳情形 08/19 21:15
5F：→ yaliu:原因为何我不晓得，不过最近比较少了...建议不要切超过三个 08/19 21:16
6F：→ yaliu:小时...... 08/19 21:16
7F：→ mzac1b:主体非常淡 甚至smear 比预期band 强很多 08/20 04:55