借用一下这个标题问一下大家... 我是用wet transfer的方式 我们实验室从以前开始都是定V的...可是看到许多protocol都是定A的 那到底怎样的方式比较对?? 或者..这两个方式可以换算吗?? 爬文了..很多人都说是定A比较对...但原因是什麽呢?? protocol-on line 也有很多人写定V... 一般来讲好像都是100V,60min, 也可以是90V,90min...,60V,4hr...??V, O/N 请问这个要怎麽换算?? 还是只是凭经验??? 我们实验室对普通的protein transfer都用100V,60min (用NC paper) 如果是1.5mm厚的话会transfer久一点~75min 但大概150kD大小的protein(看Marker) 会有一些残留在gel上 (用6% 8% 10% SDS-PAGE都是如此) 所以这时候就要加0.1% SDS罗?? 最後一个问题...如果同时要看250kD的还有20kD的protein 是不是很难在同一张membrane上看到?? 因为transfer的buffer就要不同了? 要让分子量大的transfer过去完全 又不让分子量小的transfer过头 这时候是要分开transfer吗?? 谢谢大家 ^^ ※ 引述《KIKO880 (大姑)》之铭言： : 现在有找到一些方法 : 1.降低SDS PAGE% : 不过我现在已经是用10% : 2.transfer 久一点 : 之前都只有两小时，今天已经在试O/N : 3. buffer 加0.1% SDS 以及降低methanol浓度 : 如果膜是PVDF的话，可以不加methanol : 4. wet 效率比semi-dry好 : 我是本来就用wet的了 : 谢谢各位大大的帮忙 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 219.68.81.125 ※ 编辑: anitaGo 来自: 219.68.81.125 (08/19 01:21)