※ 引述《ligase (真的不是距离)》之铭言： : ※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： : : IP 的时候 crosslink 不会减少 ab 的 heavy chain 和 light chain : : IP "western" 的时候才会减少侦测到的 heavy chain 和 light chain : : 另外 如果你不是来抄作业的 : : 好歹说一下为什麽会想问这个问题 : 我不是来抄作业的 : 因为我现在做实验遇到这个问题 : 但是前人以及我在网路上找到的其中的方法是可用DMP做crosslink : 我很努力找为甚麽可以降低的原因 : 可是真的不知道为甚麽 : 所以才发问的 : 不好意思 没有交代前因後果 : 让你误会了 : 谢谢你 因为透过crosslink将Ab接到beads上， 就等於将Ab的heavy chain，连同light chain(在non-reducing的情况下) 固定在beads上面； 这样就可以在IP过程最後的elution步骤中， 大幅减少Ab的light chain及heavy chain自beads上elute出来的量。 也因此可以降低heavy chain及light chain对最後elute出来的IP sample所造成的污染。 顺带一提， 为何要用DMP呢? 其实用其他的crosslinker也不是不可以， 但是DMP有个好处： 他的官能基: imidoester在与primary amine反应後会带positive charge， 因此在DMP对protein上的primary amine (大部分是lysine)进行反应後， 该位置的residue仍会保持原来的电性； 这样就可以减少Ab因为受到crosslinker造成的电性改变引发的对抗原affinity降低。 但是，实际用哪种crosslinker最好，还是得透过实验验证最为稳当， 毕竟不是每种Ab或beads都适合同样的crosslinking condition...... --

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