: 我在还没切的PCR products 是198 bp，使用restriction enzyme是会分成为 : 20bp、78bp，但切前和切後我发现，切前marker 的100bp指标下每个sapmle : 都会有雾雾的一条(有的人说那是primer的残留，但後来跑PCR时我的primer : 只加1μL，原本这样的情况已经不见了，但这次我换了另ㄧ家厂商的Taq，不知 : 这和Taq的关系大不大 ? 因为换了後这次又出现了那条淡淡的ban)，这样和我 : 有切的照片看起来，会觉得我有切的那照片真的切出来的下面一条是78bp还是 : promer的残留? 唔...根据以前的经验 通常primer dimer不会多长 跑胶时跑久一点就可以比较明显的分出了 而且应该要先check primer sequence是否会形成dimer 然後根据下文的condition 我觉得primer浓度可以再下降些 我们实验室是以总体积20μl primer浓度2μM各取2μl 这样子就可以减少primer dimer形成的机率 : 另外一个状况是，我的templete DNA是口腔黏膜细胞，其实量的品质很不 : 一定，拿去跑PCR，不切的话ban算亮的，但ㄧ拿去切，就变的很淡，有没有什 : 麽方法可以让他清楚点?? DNA去测OD范围有点广 40~800 ng/μL，我一直try : 条件，感觉都try不到比较好的状态。想 : 请教各位前辈!感激不尽! 这边的话我觉得相同DNA的总量会比加入相同体积好 你可以做PCR前先测DNA的浓度 然後调整到每管DNA的量约在160-200ng之间 这样子也可以减少因DNA量少而生成primer dimer的可能 此外DNA量增加也比较容易去分辨是否为primer dimer 如果真的担心盐类会影响digestion的话 是可以用一般的Phenol/Chroloform的方式来纯化DNA 但是要注意有机溶剂很容易影响之後的digestion 会导致原本可以digest转变成无法被digest 另外降cycle数也是个减少盐类的方法 只是这样的话template的量就要增加 还有跑胶...我之前的实验用1.5% agarose gel就可以分出100bp左右的band了 (我们实验室用的是Seakum Agarose Gel) 不过像是这种比较小片段的DNA可以尝试使用"Nu Sieve Agarose gel" 它号称可以分出最小50bp的片段 不过似乎比较贵些 以上是我之前的经验 希望对你能有帮助罗^^ --

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