※ 引述《calmato (Anita~)》之铭言： : ※ 引述《albertwang (会思考的鱼)》之铭言： : 不好意思~因为我是第一次接触分生~很多东西都是自己try : 或找资料或问人~所以有很多东西~不知该怎麽问或该注意什麽 : ~所以真的很不好意思~遇到很多问题却自己一直没法解决 >"< : 厂商给的information 是只有说 To make 100uM stock solution : add 255 ul of buffer : 我的working primer是从这里面取10ul primer + 90 ul water : 那我把我的所有try的条件po上来~但不知道这样是不是您说的反应条件? : 跑PCR ，total volume 30，water 19.85，primer Forward and reverse : 各1，10x dNTP 3，10xPCR buffer 3 ，Taq 0.15 ，Template DNA 2 : 以上单位都是ul。但我的DNA浓度品质不一~OD从 40~800 ng/ul : 10x dNTP 3，Template DNA 2 这两个可以少ㄧ点不过你已经可以做出来 那就不用改了不然出不来又麻烦了 使用restrition enzyme: PCR products 5，water 16.4，10x Buffer 2 : 50X SAM 0.6，enzyme 1；total volume 25，使用的厂牌是Fermentas : 它的protocal是PCR reaction mixture 10ul(~0.1-0.5ug of DNA) : water 18 ，10X Buffer Tango 2，50XSAM 0.6，enzyme 1-2 : 因为考量到我的PCR products加10会切不完整，~所以才加5，但照我的想法 : 我的DNA量不算太少，切出来应该会很清楚，但不知为何拍出来照片都很淡 : 我一直找不出原因。 : PCR products 5 这个体积是你纯化过的体积还是pcr 後30ul取出来的体积 不过两个情况都太少ㄧ点 除非你的product 粉浓 如果你怕切不完整那就加长切的时间依你加的enzyme 1 除非是相当特殊的不然16hr应该都还可以work 也想请问您刚说用酒精沉淀，是如何做呢? : 以上很冗长，感谢您的指教!! 以上有一些问题乡民回答的就不赘述(如buffer) 酒精沉淀 方法你可以到辜狗那找ㄧ下ㄧ定有 至於你这边没有交代 你所run gel 的浓度是几% 不过会出现太淡的话又想要和primer 分开 ㄧ个就是大於5%gel ㄧ个就是用长片(30cm)的gel如果贵实验室没有 那可以用跑protein page去做 然後用低伏特run --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.96.242