※ 引述《pocheng0227 ()》之铭言： : 大家好^^ : 我最近在做tansposon的实验 用的是Tn5的transposon 对象是细菌 : 目前已经进行到plasmid rescue的阶段 但是遇到瓶颈 想请教有经验的高手 : 流程大致如下: : 1.把细菌的genomic DNA用酵素digestion, 3hr. Heat inactivate : 2.ligation, O/N : 3.transform到DH5a (heat shock的方式) : 4.铺盘(含有抗生素kanamycin) : 接着将盘上长出来的colony养菌, 然後抽plasmid, 可是都抽不出东西 : (这个部分这样做对吗?) : 我发现transform, 铺盘之後长出来的DH5a, 生长速度很慢 : 37度C, O/N长出来的colony很小颗, 我还多放了一天 : 会不会有可能是污染呢? : 还是说digestion ligation的过程有可能出问题? : 感谢回答^^ 应该是长杂菌。你做的这个方法本来成功机率就不高吧?! genome那麽大，而transposon只跳到一个位置，要用用酵素切又要sel-ligation 本来机率就很低，就算成功应该也只会1,2颗而已吧! --

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