※ 引述《pocheng0227 ()》之铭言： : 大家好^^ : 我最近在做tansposon的实验 用的是Tn5的transposon 对象是细菌 : 目前已经进行到plasmid rescue的阶段 但是遇到瓶颈 想请教有经验的高手 : 流程大致如下: : 1.把细菌的genomic DNA用酵素digestion, 3hr. Heat inactivate : 2.ligation, O/N : 3.transform到DH5a (heat shock的方式) : 4.铺盘(含有抗生素kanamycin) : 接着将盘上长出来的colony养菌, 然後抽plasmid, 可是都抽不出东西 长出来的菌没先check过吗? plasmid抽不出来是怎样的抽不出来? 是没有pellet还是跑不出东西? : (这个部分这样做对吗?) : 我发现transform, 铺盘之後长出来的DH5a, 生长速度很慢 ^^^^^^^ 印象中这只长出来的很像都不大~ ^^" : 37度C, O/N长出来的colony很小颗, 我还多放了一天 : 会不会有可能是污染呢? : 还是说digestion ligation的过程有可能出问题? : 感谢回答^^ 其实这样描述还是很难讲问题出在哪~ 感觉很像中间略过很多步骤 不知道你们是怎麽确定colony的? --

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