大家好^^ 我最近在做tansposon的实验 用的是Tn5的transposon 对象是细菌 目前已经进行到plasmid rescue的阶段 但是遇到瓶颈 想请教有经验的高手 流程大致如下: 1.把细菌的genomic DNA用酵素digestion, 3hr. Heat inactivate 2.ligation, O/N 3.transform到DH5a (heat shock的方式) 4.铺盘(含有抗生素kanamycin) 接着将盘上长出来的colony养菌, 然後抽plasmid, 可是都抽不出东西 (这个部分这样做对吗?) 我发现transform, 铺盘之後长出来的DH5a, 生长速度很慢 37度C, O/N长出来的colony很小颗, 我还多放了一天 会不会有可能是污染呢? 还是说digestion ligation的过程有可能出问题? 感谢回答^^ --

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