※ 引述《bider (买沉木)》之铭言： : 小弟这几天做IP : 用monoclonal anti-mouse的1抗 : polyclonal anti-goat的2抗 : 结果western出来结果很多杂band : 想请问有没有前辈有类似经验的可以解决@@ : 按理来说 : 不同的Fc应该不会有问题才对 : 是因为polyclonal造成的吗? 今天考完试刚好有时间来研究一下 首先你的antigen是mouse protein 1st ab 是goat anti mouse 2nd ab 是XX anti goat 这样吗? 根据我遥远的记忆(不好意思我好久没作了@"@) 通常都会写抗体的的物种(吧?) 这样可以很清楚的表达每个蛋白质的来源 这是不相干的事情 只是好奇一下 IP或者其他免疫学方法会出问题通常都是一抗 因为二抗很容易就可以买到各式各样很棒的抗体 然後就如同有人推文说的 一抗用polyclonal比较容易成功一点 不过这个抗体是哪来的? 如果是买来的他的data sheet有说可以作IP吗? 有的话用他建议的浓度试试看 这样还作不出来就可以把sales叫来抱怨了 XD (前提是!! 你要先排除操作上的问题) 然後对买来的抗体不要太有信心 我试过买三只才成功的 (所以我爱死RT了~~!) 真的作不出来请好心又利害的学长姐或同学帮你试试看吧 说不定真的是抗体的问题 --

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