作者crement (cometoseeme)
看板Biotech
标题Re: [讨论] semi-dry transfer的条件应该怎麽抓?
时间Sat Jul 19 09:42:03 2008
买0.22吧?!这个不太会穿过去。
除非有特殊理由,不然好像大家都用这种。
可以用那种mutlicolor protein marker。
用这个观察transfer的效果,
顺便看看不同大小protein的效果。
因为不太会转穿过去,用semidry比较担心是转久了乾掉,membrane会『烧到』。
之前一般的gel我们用0.8mA/cm2,转两个小时,
非常乾净,但是很久。
或是1mA/cm2,一小时也差不多,
同事这个condition45分钟,一般大小也都可以过去。
※ 引述《LIAR (堕天使)》之铭言:
: 由於我刚换新的system,包括buffer、胶的厚度、sample来源等等都和之前不一样,
: 请问这种情况想抓条件,怎麽做比较好?
: 我目前觉得要处理两种情况,一个是没转过去,一种则是转过头。
: 如果是转不完全,可能会采用coomassie blue染转完的胶,听说coomassie blue灵
: 敏度够高,没染到应该就可以视同大部分都有转出去了。
: 至於转过头嘛....目前我只有NC和.45 PVDF。
: 虽然我有看过「拿两张PVDF,先.45再.22,之後染.22」来决定,不过只为了几次
: 抓条件就买一大卷.22 PVDF有点浪费,而我也不晓得NC或是.45 PVDF本身叠两层
: 有没有同样效果....
: 目前我只有想到这些方法,请问想找出最合适的条件,可以请大家给我一些指点吗?
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1F:推 LIAR:不过也有人说.22的背景很多.... 07/19 23:17