作者SQRT (人在做天在看~~)
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标题Re: [问题] 对老鼠打thioglycolate来收集macrophage
时间Thu Jul 17 20:42:01 2008
※ 引述《onlyone0419 (期待)》之铭言:
: ※ 引述《hosaile (我和你:))》之铭言:
: : 目前我所看到收集mouse peritoneal macrophage的方法大多是对老鼠腹腔
: : 注射thioglycolate後三天,用PBS or DMEM(with FBS)将peritoneal macrophage
: : 收集出来,而既然收集macrophage,想必就是要观察在macrophage当中的一些
: : 基因在被treat某些药物後是否会被活化或抑制,也就是引起发炎反应
: : 但是我的疑问是,用thioglycolate注射腹腔後,聚集到腹腔的macrophage是否
: : 就已经被活化而引发发炎反应了?这样我们之後在加药给收集出来的primary
: : macrophage观察到的基因表现,是不是就不那麽单一的受到我们加的药物影响了?
: : 请问有版友可以回答我这问题吗?感谢大家喔!
我几年前念研究所的时候,seminar的时候曾经有听过人家报这样的paper
比较thioglycolate跟一个...(我忘了是什麽东东的东东Orz)...
刺激小鼠腹腔内macrophage的产量&所产生的macophage特性
就是讨论macrophage是否因刺激而活化
确实thioglycolate的刺激会使macrophage有被活化的现象
而且产量也没有"那个什麽东东"来得好
因此作者认为要使用由thioglycolate所诱导产生的macrophage来做免疫反应的实验
必须要考虑到所收集到的macrophage是否已经被活化
ps:歹势啦!我真的忘记那个东东叫什麽东东了~不要来问我!Orz
(但去PudMed搜寻一下应该可以找得到paper...不过就是3~4年前的事 Orz)
: 想请教一下...
: 用TGM诱导出的peritoneal macrophage
: 我们会先养三天(好像是三天...再问学长看看)
: 但是之後却冲不太下来,用刮得又死好多 = =
: 因为要上FLOW所以想收集细胞起来
: 有大大知道如何解决此问题吗<(__ __)> thx
: 养三天是因为怕他取出来时是活化态
: 还是说打TGM所取得的macrophage并不会是活化态@@?
取出来後是放到dish里养吗?还是flask?
我是都放在flask里养,因为从腹腔取的不会有血球比较乾净
等贴附後冲掉没贴的,养个一天就会拍下来了分盘了(用flask的好处~可以拍)
不论是primary cell or cell line~
只要是macrophage都不适合用刮的(教科书都有写捏!)
更不能用trypsin唷!(教科书都有画星星+底线_+粗体字)
嗯!可能是我比较不温柔~所以我喜欢用"拍的"胜於用"冲的"
拍了两年~macrophage不管是从哪里来的都会被我拍下来呢!(得意ing)
另外,我判断macrophage有没有被活化都是看他的型态
被活化的macrophage...脚就会伸出来了...跟没活化的差很多
应该很好分辨才是...尤其是primary cell更明显
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◆ From: 122.116.182.213
1F:推 onlyone0419:感激啊~~<(_ _)> 07/17 21:34
2F:→ onlyone0419:请问刚取出来您都先让他贴覆多久啊~? 07/17 21:35
3F:→ SQRT:差不多4小时就可以洗掉没贴的了,怕的话就贴一晚吧!^^ 07/18 23:28
4F:→ SQRT:不过在冲的过程中要小心会吸到脂肪~~很容易因为吸到脂肪造成 07/18 23:30
5F:→ SQRT:爆冲~然後pipetman就呛到了(虽然吸到脂肪~很好玩~但不能玩唷) 07/18 23:34
6F:推 onlyone0419:感激<(_ _)> 07/21 12:06