作者moon0925 (moon)
看板Biotech
标题Re: [求救] 关於裸鼠活体注射实验
时间Fri Jul 11 19:26:40 2008
有许多可以无限制继代的细胞
像是癌症细胞
HYBRIDOMA
接者到小白鼠体内 产生腹水
大约两三周就死掉了
所以 如果你是初代细胞
应该不会有这各问题
但有些供应小白鼠的单位
其鼠源并不是很好
也注意一下你的饲养管理吧
※ 引述《tincta (薰?那我的碇真嗣呢?)》之铭言:
: 事情是这样的。
: 在下前一阵子将培养的细胞株,
: 以皮下注射的方式,
: 注射到裸鼠的皮下前後腿脚窝处(腹侧面)。
: 在注射完一周时,
: 基本上鼠只(N=6)都还存活,
: 但我有发现鼠只的眼睛以及脚指有不正常的肿大。
: 然後也不是很爱动。
: 但是再过一周,就只有2只为活体。
: 老鼠肢体末端也呈现黑色坏死。
: 因为行政上的缘故,
: 所以我是在A实验室培养细胞,
: 回溶於PBS(高温灭菌但无过filter)中,
: 在骑车到实验室B的动物房注射。
: 我在想我的裸鼠会大去,
: 是不是因为细胞株在运送过程中污染?
: 还是说因为我是第一次注射活体,
: 在没有人指导前处理的情形下,
: 在操作上产生污染?
: (因为我有使用pipette,我後来有听说,
: 事实上pipette是最容易污染的,
: 宁可使用塑胶用过即丢的auto-pipette比较保险。)
: 我後来也回想说,是不是我自己灭的PBS会有问题。
: (那也是我自己配的,用实验室一般用药配置)
: 我在想应该势必要重新再来,
: 所以不晓得有没有先进可以提醒我一下,哪些步骤应该要非常小心,
: 才不会又使裸鼠死亡?
: 另我想下次直接去药局买医疗用的生理食盐水来打散细胞,
: 以防止自己因为自己灭的PBS出问题而使裸鼠感染。
: 在此我想我要简述一下我的实验步骤:
: 将细胞株由培养的T25上以trp打下来,离心後再打散於medium中,
: 之後进行细胞计数,并取适量细胞液离心,取得十的七次方细胞数/每管。
: 此时去除上层medium,加入高温灭菌过的PBS打散细胞,使细胞悬浮。
: 将装在eppendroff中以预备好的细胞悬浮注射液在flow中,置入夹链袋中,
: 放在口袋中保持体温,(骑车)至动物房。
: 以医疗用注射筒,皮下注射於裸鼠前後腿窝侧腹处。
: 我目前想出的改进点是,不再使用pipette,
: 而使用用过即丢塑胶制auto-pipette,
: 以及在打散的步骤中,
: 使用医疗用针筒打散细胞株,
: 并且我想用药局卖的医疗用生理食盐水取代原本自己灭的PBS
: (但不知此点是否可行?)
: 所以还请各位版友多方指正,
: 真的很需要各位的帮忙。
: By seminar接近爆炸的硕一升硕二但却是实验室最大的忐忑研究生
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.121.243.245