1. RNA isolation 2. to remove DNA residue 3. 至少200x稀释定量RNA 取1.2ul RNA / 240ul水,用80ul的cuvette测3次OD,其结果取平均数换算实际浓度 4. Amexxxxx Ready to go RT-PCR 猪猪 超好用,一科科的beads等於厂商帮你 做好酵素的定量避免人为误差,只需要补水跟等量RNA 所以只要根据在第三步所得知的RNA浓度,取出等量RNA在用水补到大家一样体积 在加进bead混合均匀 5. 根据说明书,用PCR machine 合成 cDNA pool 6. PCR定量 housekeeping gene"s" 如果上述步骤做得紮实,以我个人的经验来说,有非常非常多次 甚至只需取等体积的cDNA,就能获得亮度以及大小一致的产物 P.S. 请load 大well 多测试另一个housekeeping gene PCR cycles 请控制在 20-22个 7. 微调 PCR 定量 band 粗一点 下次 cDNA 就load 0.9x 体积, band细一点就反之 load 1.x 总之自行找一个当作基准点,或多或少自行判断 8. 最後根据以上 PCR 目标基因 --

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