strong choatropic agents（要怎麽翻译阿？）常见的包括了urea、guanidine HCl等 通常搭配一些reducing agent（如:2-ME、DTT）可以有效的进行protein denaturation 因此想来问问有接触过urea或guanidine HCl的版友 一些相关问题 实验材料为Halobacterium 为高盐古细菌 原核但不具有细菌的细胞壁 1.我只单纯想要进行denaturation 而不进行renaturation或degradation 目的是希望能够去除DNA上的binding proteins 之後将会通过anion exchange chromatographic column 目前是使用QIAGEN genomic-tip的column和protocol QIAGEN Genomic DNA Handbook (protocol下载) http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000216 其中使用大约0.8M的guanidine HCl(GuHCl)进行deproteinizing（50度 一小时） 之後再通它的genomic-tip column（anion exchanger） 但是目前发现deproteinizing效果不好 抽出的DNA还是有protein残留 参考各书籍大多用6M GuHCl进行denaturation 而且QIAGEN protocol中的deproteinizing buffer不含有reducing agent 由於实验需要 必须不degrade proteins的情况下 抽出不含proteins的DNA 并且不用phenol/chloroform的方法 所以目前打算使用高浓度的choatropic agent和reducing agent进行去除蛋白质 原本打算用6M GuHCl+ 1mM DTT进行deproteinizing 但是看一些网站讨论说GuHCl因为会解离成阴阳离子而干扰离子交换进行 所以不知道是否有网友曾用过6~8M Urea进行protein denaturation， 并进行接下来的离子交换呢？有没有什麽心得和经验可以分享的？ 2.由於我实验的sample有用formaldehyde进行DNA-protein cross-linking实验 (ChIP) 不知道实验使用这些strong chaotropic agents (urea、GuHCl) 是否会与cross-linking (covalent bridges)进行反应而导致reverse？ 即使是极为微小的资讯对我来说都是莫大的帮助 如果您愿意提出意见 我将感激不尽 --

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