作者microball (无华之果)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问有关於FRET
时间Sun Jun 15 11:03:59 2008
: 我本身有两个PROTEIN,
: 各接在不同的萤光蛋白上,
: 一个会发绿光,
: 一个会发红光,
: 想看看这两个蛋白是否会colocalization,
: 想学用显微镜做FRET...
我们实验室做过的是 CFP/YFP FRET
我知道现在红绿可以做 FRET，但是你可以要查查看你的萤光蛋白效率够不够好~~
: 可是问过系上老师(荷兰人),他BRALA BRALA讲了一堆,
: 结果好像被阴掉了(居然被拿去试他自己和其他老师的project,根本不想帮我)
: 虽然心有不甘,
: 可是也没办法,他是管学校显微镜的老师..
: 请问这个实验是只有软体部分比较难还是连显微镜都很特殊,都很难用??
基本上 FRET 是个相对简单的实验
只要能做 photo bleach，就算在普通萤光显微镜也可以做，也不需要活体。
: 他跟我拿了original images (当初做cotransfection在萤光显微镜下的照片),
: 说要做signal 比较之类的,
: 後来也没下文....
: 另外一问,FRET可以用FIXED 玻片看吗??
: 因为他也只跟我要玻片,
: 他们自己是用LIVE CELL在莱卡的显微镜下做FRET~>_<~
: 请问板上有人可以帮帮我解答这些问题吗??
: 被当笨蛋耍的感觉真不好受@@
我建议你要有 positive control：
(1) 你可以 construct 一些已知会有 physical interaction 的蛋白
(2) 或是你可以做个 绿-红 萤光 fusion protein，这更直接
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这是你吗 你要这样的过吗
这是你吗 你错过了自己吧
就这样吗 把你自己信仰 来换别人所谓的天堂
这是你吗 是谁给了你框框
这是你吗 把你自己都遗忘
你的心 毕竟是你自己的地方
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.32.9
1F：推 oplz:有 intereaction 不一定会产生 FRET, 如果你仔细看式子, 里面 06/16 12:50
2F：→ oplz:有一项参数是角度..到目前为止还没有办法有效预测..所以就算 06/16 12:52
3F：→ oplz:距离很近 也不能保证就会发生 FRET 06/16 12:53
4F：→ microball:yah, FRET is tricky, but in many case it works 06/16 12:56
5F：→ microball:there is a FRET screening paper on this week Science 06/16 12:57
6F：→ dakota:本文说的没错就是你两种萤光蛋白都必须够亮 这样结果比较好 06/16 15:47
7F：推 lstlst:看到楼上的讨论,看来还是乖乖做好IP><" 06/17 07:15
8F：→ lstlst:还要赶快去找楼上说的PAPER来瞧瞧 06/17 07:16