作者nk12914 (寻找)
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标题[求救] 这样的结果还能继续往下做吗??
时间Thu May 29 00:11:04 2008
前不久有PO版
也有一些网友给了我建议 像是check产的protein有没有毒性
但没有paper有提到 而且其实这个protein先前就有paper induction成功
只是我的实验 选用的vector不同 但都是pET系列的
可是怎麽做都遇到问题
问题如下:
实验try了三种菌去做induction BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE
SDS-PAGE始终都无法看出明显很粗induction的BAND
甚至连空的菌(没有transform的)都在差不多的位置有看到BAND
根本无法看出空的菌、没有induction、跟有induction的差异(因为在那位置上 都有BAND)
後来压WB 空的就没有BAND 而没有induction跟有induction都有明显的band
但两者看不出差异 好像根本就是不用加IPTG 就可以跟有加IPTG的结果一样
图档如下 预期的size为47 kDa
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=shuo218&b=3&f=1786188116&p=0
C:control 空的菌(没有送入plasmid)
N-1、N-2:没有induction
其余为不同浓度的IPTG(0.5mM、1mM、2mM) 37度C 三小时
上面的结果必须要WB的情况才看的到 SDS-PAGE无法区别(因为连空的都有BAND)
那可以继续往下做purify吗?
还是应该在修正其他condition吗?
因为已经做到鬼打墙的地步 想寻求大家的帮忙
大家觉得可以继续往下做吗?
之後purify的protein会用来打兔子产Ab 还有treat 细胞
已经卡在induction很久一段时间了 再没结果大概就要换题目了
可是又不想放掉 想请大家帮帮忙 是否有什麽地方应该修正的
小弟在此先深深地鞠躬感激 谢谢了!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.129
1F：→ aggaci:protein是soluble form就有做的价值！ 05/29 00:29
2F：→ aggaci:不是inclusion body就该谢天谢地了 05/29 00:29
3F：推 aggaci:量少大不了养多一点 05/29 00:32
4F：推 liuse:量很少耶 就算养几百c.c来纯化也purity也不会高 05/29 00:42
5F：→ liuse:这样打兔子出来抗体也不一定能用喔 05/29 00:42
6F：推 serv:你没有纯化耶 有纯化的话浓度会高很多才对 05/29 03:15
7F：推 Ren:我觉得有东西…所以是我的话会纯化看看有多少 05/29 07:09
8F：→ Ren:有时候PAGE是不太好用的，always case by case 05/29 07:10
9F：推 wanyi:我觉得温度可以降到室温overnight做做看~对有些protein有效 05/29 09:47
10F：推 Ren:我的SDS-PAGE状况还比你糟，可是产率也还有10~ 25 mg. 05/29 13:49
11F：→ Ren:以上per liter. So, because you have tried, why not purify 05/29 13:50
12F：→ nk12914:谢谢大家给我的建议 我会往下试试看的 谢谢!! 05/30 11:15