作者albertwang (会思考的鱼)
看板Biotech
标题Re: [求救] mutant-enriched PCR 文章问题
时间Sat May 17 12:17:56 2008
※ 引述《linker0726 (哀..烦阿)》之铭言：
: ※ 引述《albertwang (会思考的鱼)》之铭言：
: : 首先我在对全部基因的seq时发现一件事情
: : paper上的enon跟NCBI genebank不同刚好跳一下
: : 在 paper 在 NCBI
: : exon19 等於 EXON21
: : exon21 等於 EXON23
: : 这是一件粉神奇的事情
: : 一开始我以为是isoform
: : 但是刚刚再却确认一次(不过有可能我太累了 有高手帮指正)
: : 还是一样
: : 再来你的疑问
: : 这不困难重点在他的primer设计
: : NC_000007.这是基因的代号NCBI的
: : EXON 21
: : ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca
: : aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg
: : EXON23
: : cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc
: : ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc
: : AGCATTTTCCTGACACCAGGGA
: : 大写部分是primer
: : ()部分是限制每
: : 他对限制脢改变所以pcr结果会出现图2
: : 至於图1陷阱需要看实验方法才能董
: : 这你就自己读一下罗
: : 呵呵加油
: 图一有陷阱?
: 其实我看不懂图一最後Wild的画法 好几条虚线代表什麽?
: 而且跑完第一次PCR用限制酶切後
注意他已经做突变所以不会切
他有星号文章有写和原本不同了
看图是不准的
: 到底第二次PCR时会不会再放大 它好像也没讲到
: 我觉得图二应该跟图一之後无关 他只是要测它的敏感度
: 所以用WT下去稀释 直接下去跑PCR 然後用同样的限制酶切
: 这边看来 好像第一次PCR完用限制酶切 之後好像会在黏回去?
再回去看看内文罗
: 不过不知道会不会再放大?
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