作者albertwang (会思考的鱼)
看板Biotech
标题Re: [求救] mutant-enriched PCR 文章问题
时间Sat May 17 00:11:47 2008
※ 引述《linker0726 (哀..烦阿)》之铭言：
: http://clincancerres.aacrjournals.org/cgi/content/full/12/1/43
: 我看了这篇文章
: 有一个地方很不解
: 就是他Fig. 2跑Gel时确认时，本来WT的不是已经用限制酶切过了(配合Fig. 1)
: 应该是会断成好几个片段(应该是两个)
: 为什麽到这边就变原来的一段了呢~?
: 注:WT分别是A图的138bp和B图的130bp
: 感谢
首先我在对全部基因的seq时发现一件事情
paper上的enon跟NCBI genebank不同刚好跳一下
在 paper 在 NCBI
exon19 等於 EXON21
exon21 等於 EXON23
这是一件粉神奇的事情
一开始我以为是isoform
但是刚刚再却确认一次(不过有可能我太累了 有高手帮指正)
还是一样
再来你的疑问
这不困难重点在他的primer设计
NC_000007.这是基因的代号NCBI的
EXON 21
ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca
aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg
EXON23
cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc
ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc
AGCATTTTCCTGACACCAGGGA
大写部分是primer
()部分是限制每
他对限制脢改变所以pcr结果会出现图2
至於图1陷阱需要看实验方法才能董
这你就自己读一下罗
呵呵加油
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