作者tzengchichau (无)
看板Biotech
标题Re: [方法]帮个忙看一下~~纯化protein
时间Mon May 5 21:24:29 2008
※ 引述《hungte0928 (Damon)》之铭言：
: 现在都在进行蛋白质纯化的进度
: 可是binding到我要的protein少之又少= =
: 这让我很困扰
: 我的作法是先将我要看的序列转到BL21上面
: 利用它大量产生protein
: 养好小量後lysate
: 用sepharosre去binding我要的fusion protein
: 用PBS洗了几次後再用elution buffer
: 从beads上洗下来我要的
: 可是每次跑SDS-PAGE都看不到我要的band.....救命ㄚ= =
: 有人有更好的方法可以告诉我吗??
: 或者要注意的地方~~~感恩阿!!!
: p.s.是不是在buffer里加DTT会比较好一点@@
先确定你的蛋白质是否有被induction
可以养小量後，直接用1X sample buffer lyase 95度去煮
之後跑sds-PAGE 看是否有你要的蛋白质。说不定你的表现量跟本就很少
当然你在纯化时，还会损失所以就看不到了。
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 219.68.86.29