作者boyo (29大头)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问制作knockout mice 通常都多久？
时间Sun Apr 6 21:27:17 2008
※ 引述《biolancer (Incomplete....)》之铭言：
: 如题，好奇想知道台湾会作knockout mice的实验室比率有多少？
: 若从养小老鼠到真正制作，时间大概多久？
: (以前有听说最少要半年 不知现在有没有好一点)
: 会不会因为要剔除的基因不同而制作时间不同呢？
: 感谢大家解惑了～
忘记回答你问题了 抱歉
knock out老鼠要做出来分成几个阶段
第一个阶段你要先做homologous recombinate DNA construct
就是一长段DNA序列 跟你要剔除的基因非常接近 只是少了一个或几个Exon
这个大概要三个月左右
第二个阶段要做Gene Targeting
把前一个阶段作好的construct 电到 mouse ES cell里面
接着用不同的antibiotics做正负selection
这个要一个月左右
第三个阶段是做southern screening
就是把前一个阶段的 ES clone做进一步的筛选
从设计probe 做membrane 到完成3'端与5'端的screening
大概也要一个月
第四个阶段是做 Cre or FLP transfection
这会看研究者的需求是要看全身的剔除或是只有特定tissue来做
大概要一个月
第五 最後则是把"正确的"ES clone拿去打blastocyst
B6的孕期大改是在23天左右
技术好的话一个月就可以拿到Chimera
扣掉实验会有失败以及困难的部份 大概就一年左右可以拿到chimera
其实每个阶段的实验还有很多细节与变化
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如果孔子是那待沽的玉
我便是待斟的酒
用一生的时间 蕴酿自己的浓度
只为等待刹那的倾注
张晓风 酿酒的理由
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.120.15.179
1F：推 freesoul:一年就拿到老鼠绝对是运气很好都没出错才有可能 04/07 04:26
2F：→ freesoul:话说我实验室一个postdoc的老鼠就弄了快两年.... 04/07 04:27
3F：推 HIbaby:看基因喔, 有个学长KO了数个基因 很快很准. 04/08 09:09
4F：→ HIbaby:但是从别人那边接手一个别人做不出来的gene. 04/08 09:10
5F：→ HIbaby:结果他也弄不出来..Orz. 所以有些因素可能目前还不清楚 04/08 09:11
6F：→ biolancer:恩~原来基因也是影响的一部份 我还以为技术差不多 谢谢~ 04/10 11:02