: 1.就我个人经验，PCR product做TA cloning时， : 这样的ligation成功机率非常高， : 非常容易得到多且正确的colonies。 : 但其他的steaky end ligation很少有如此高的成功率。 : 所以你後来得到的colony数目不多实属正常现象。 : 不过我也不知道为什麽TA ligation的效率会比 : 其他steaky end ligation来得高， : 有没有高手解答一下？ 我认为TA效率高的原因可能是因为 TA ligation 只需T与A一个mer之间的碰撞即可，且TA又是双氢键，键能亦比CG低 反观像是RE digestion的steaky end多为四个mer 所以就机率与键量来说ligation效率应该会比较高 : 2.请问原po有没有注意vector和insert之间的比例？ : 一般来说， : insert的量必须远高过vector， : 效率才会好。 : 不过重点是， : 其实只长一颗也没关系呀， : 有中就好!! : 3.检验pEGFP-N1有无被切开， : 可以跑胶比较切以前和切以後的plasmid大小， : 虽然被切下的部分只有40-50bp应该看不到， : 但是如果环形的plasmid有被切成线形， : 跑胶後大小会和原本的环形差很多。 : 4.不知道你有没有做vector only和insert only的control? ※ 编辑: countonme 来自: 140.114.100.189 (03/26 18:05)