作者kakaman (日子过的真快阿)
看板Biotech
标题[求救] 2D
时间Mon Mar 10 14:45:39 2008
最近做2D
银染完的gel变成一块相当美丽的昆布
漂亮到想拿去熬汤...
整片gel跑出来的点很少 数一数大概六七个...
因为染不出点 所以染很久 所以marker黑道发亮...
想请问一下 这可能是哪里出问题?
顺带一题 buffer都是现配的...
下面是配方:
1. Fix:50% methanol
25% acetic acid
2hr
2. 30% methanol for 15 min
3. ddH2O 5 min 3 times
4. 0.8mM Na2S2O3 for 2 min
5. ddH2O 5 min 3 times
6. silver:0.2% AgNO3 for 25 min
7. ddH2O 30 sec 2 times
8. Develop:0.28M Na2CO3
0.016mM Na2S2O3
0.0183% Formaldehyde
9. wash briefly
10. 0.042M Na2EDTA 10 min
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.92.59
1F：→ aggaci:昆布PAGE是因为醋酸没洗乾净的关系~~~想当初我也是ㄧ样 03/10 14:49
2F：→ aggaci:很怕被别人看到...好丢脸.... 03/10 14:50
3F：→ aggaci:2D是个很难搞的实验，原PO加油！ 03/10 14:51
4F：推 dankai:你清洗的步骤没做好..就像一楼说的!!这步做好~~你的gel会很 03/10 18:01
5F：→ dankai:漂亮~~~~当初也是没注意清洗的步骤~像昆布一样!原本该有的 03/10 18:02
6F：→ dankai:点....因为背景太黑也看不到~~~ 03/10 18:02
7F：→ dankai:如果这个解决还没有点....你萃取的方法可能有问题!要修改~ 03/10 18:03
8F：→ dankai:刚看到~~~"因为没点所以染很久" 应该是一开始萃取就出问题~ 03/10 18:04
9F：→ dankai:染太久....胶一样会过黑甚至你的蛋白质点会反白(银)~~ 03/10 18:05
10F：推 canstrong:开始跑之前有没有先定量？你跑多少蛋白呢? 03/10 22:39
11F：推 owlflying:如果培养基中糖份没去除乾净也是可能糊糊的样子 03/11 17:12