※ 引述《oopa (11)》之铭言： : 最近要使用Lewis lung cancer cell打入B6小鼠(非免疫缺陷鼠)建立肿瘤模式 : 根据要看的参数,欲分别采用尾静脉注射与皮下注射方式注入细胞,观察肿瘤发生的情况 : 关於这样的模式在执行上有些问题想请教: : 1.就目前个人搜寻的文献中,皮下注射所使用的细胞量似乎都高於尾静脉注射的细胞量, : 这样的认知正确吗?还是我个人文献阅读量不够,或刚好挑选到同类文章所造成的错误 : 认知?若认知无误,可能原因为何? : 2.根据文献所言,打入静脉的总细胞液量从100ul-200ul不等 : (200ul是protocol建议的最大量) : 我有试过的结果,因为技术不佳,成功注入最多150ul左右,再多就推不进去了, : (应该不是打到别的地方,因为注射时其他部位没有肿胀,且在注射量达150ul前都顺畅) : 但因为该实验无法等我技术完全OK後再进行, : 因此在使用相同细胞数目下,总体积减少,势必细胞浓度会增加 : 请问细胞如果浓度较高 对於老鼠本身是否有明显影响? : 有好心人可以分享经验吗?有没有可能细胞太浓让小鼠血管栓塞? : 3.静脉注射所使用的针头需要使用几号针头才不致使细胞破裂? : (目前练习使用26G针头灭菌後的PBS) : 以上问题还请好心的高手们分享经验与看法 : 感谢^^ 1.原po利用的Lewis lung cancer cell不知是那种tumor cell line 如果我猜的没错 跟我以前应该使用应该相去不远 我是用B?/F10 nad B?/F0 都是melanoma cell line (lung cancer cell line) 两个差别在 metastasis 能力强弱 (F10强) 如果是这类Cell 以下的资料 可提供原po一些方向 2. 就tumor model来看 使用这类的tumor 打回去B6上 的两个优点 (1). 省下了immune的问题 因为是同种类mice上去分离出的细胞 (2). 这些是黑色素肿瘤细胞在 观察及生长速度上 非常适合做研究 蛮快的 3. 原po内文中提到 SC 跟 IV 我都做过研究 基本上 以我个人看法 这是两个不同的model所以 cell number这点 个人其实并不需要一致 反倒 Foucs应在看study的model跟mechism上 这边就先提个 tumor research 的几个重点 不外於下面的几点 1. Proliferation 2. Invasion 3. metastasis 当然除了这3点 还有一堆 有的 没的 ex: angiogenesis.hypoxia.adhesion molecule.coagulation.... 不过 请注意到一点 tumor的可怕 不在於他的生长大小跟速度 而在於他的术後再发生率(此点与metastasis习习相关) 如果只是在原位生长 那样tumor disease就没那样的另人恐剧跟束手无策 [说个玩笑话.tumor不转移.有tumor就动动刀拿掉就好了.少1只脚总比少了一条命好 ^^ ] 拉回重点: sc & iv injection s.c. model: 这边看的大部份在於tumor如何在皮下proliferation.adhesion. angiogenesis.invasion for transmigration to blood(後期) i.v. model: 主要focus在 metastasis and coagulation adhesion and locatization 一般的tumor都是原位生长到一定大小 进而invasion到血管淋巴细统 造成无法完全治癒最严重 所以 因此一般的皮下注射量多 是因为一方面 s.c的injection 原位增生.养份需等到angiogenesis完成後(增生血管足够提供tumor养 份)tumor才可以长到一定大小去侵入血管 进行转移 当然一般文献注射量多 还是需要考虑到该细胞本来的生长难易成度 及是不是想同时观看转移等等因素 如果是i.v. injection 生长的问题就比s.c单纯多了 (增生血管要做什 还不是提供养份 ) 不知道这样的解释 能否提供你对皮下注射量需大於i.v注射量的理解 不过就我个人意见 这两个study的方向不同 细胞数相不相同 就不是那样重要 但是每个人culture的细胞都有自己的生长速度, 所以其实我都是先用一定量 去抓几天可以看到结果 ,再反过来控制细胞量的多寡 让我可以在预期时间去做实验 分享一下 我以前打的剂量: (1) iv: 5 x 10的 4次方 到3x10的5次方 就很足够 14天就可以在lung看出tumor (2) sc: 3~4 x 10 6次方 20天 观察tumor皮下的 growth rate (3) solution的量: 我都控制在80~120ul 通常我都用100ul 这点 我觉得200ul的确是上限 原因: 一只小鼠的血液量约在1.5~2.3ml 如果你一次超过总血量1/10以上的 dilute 会对mice产生蛮大的影响在 blood system 但以前我在练习tail vein injection 一次打1ml的Saline是没问题的 所以原po可能在injection 可以再下点功夫改进一下 个人经验上,建议控制100ul真的是差不多了 至於细胞浓度上 应该是还好 我也有打过7次方 应不致於thrombosis跟对老鼠有太大伤害 反倒是i.v打进去时 注意一下soln.温度 太冰 老鼠会马上卦给你看 (4) 有没有injection应该是不难看出 如果是尾巴 可以在打进去的瞬间看到 尾巴变白 血流会通过 但是你如果是打B6就 观查上有点难度 通常还有一种是利用眼窝静脉丛注射 我比较喜欢那种打法 因为B6的尾巴不好打 (5) 关於针头大小 是否会影响存活率 我有做过实验 18G.26G.跟30G 其实并不会影响 我建议用一般1CC针筒附的那种 应该是26G罢 就足够了 30G 感觉上 阻力大多了 (6) 关於PBS跟normal saline 其实如果练习上来讲 不建议用PBS 实验的经验上 PBS比起saline 老鼠似乎有时会因为打PBS而卦点 或许是 因为盐类的影响 所以 可以注意一下 (7) assay sc: growth rate/angiogenesis(matrigel)/hypoix/adhesion... iv: coagulation /CBC/ organ IHC / anti-tumor drug.. 第一次在板上分享了这些实验经验 希望对原PO有所帮助 如果有问题 也欢迎mail给我 或许可以提供你意见 不过真的是太久没做那方面实验 有些东西都忘了 有记起来再补上去 以下有2张我以前做的图片连结 给你参考一下 http://www.flickr.com/photos/22868929@N03/?saved=1 --

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