作者bluecsky (我要蓝蓝淡淡的天空)
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标题Re: [求救＞＞为什麽用pCRII-TOPO cloning vector꘠…
时间Thu Dec 20 08:31:23 2007
※ 引述《seal0413 (seal)》之铭言：
: pCRII-TOPO听说是最好接也较贵的cloning系统
: 我的pcr product 大约 140bp左右
: 我挑蓝白有挑到
: 抽plasmid 也有比vector高一点(我跑胶跑0.8%且第一条DYE跳海後又多跑一下)
: 只是去切enzyme ECO1(VECTOR上的)
: 就怎样也切不出 140bp左右的位置
: 请各位有用过TOPO的大大帮忙
: 感谢不尽^^
这个TA kit我有用过
我都是直接拿M13 forward primer + insert forward primer跟
M13 reverse primer + insert forward primer(因为有正接跟反接)
直接做PCR screening
然後就把positive的抓去送定序了
至於跑gel的话..没记错的话
TOPO约5.7k..你才多140bp..要明显的分出来好像有点难
然後如果你真的想要明显看到有140bp的话
建议把gel浓度提高到3%以上(我会跑6%的拉XD)..这样100多bp的都可以很明显的看到
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