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标 题Re: [求救] 请问Anti-goat二抗的Blocking要用？
发信站清华生命科学 BBS (Wed Dec 12 02:56:24 2007)
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※ 引述《[email protected] (LittleBU)》之铭言：
> 一抗是Goat anti-mouse的抗体
> 二抗是Rabbit anti-goat IgG
> 现在的问题是在western的时候会有background
> membrane是用5%脱脂奶粉blocking 1hr
> 上网查到是说anti-goat IgG会跟bovine的IgG作用形成背景
> 所以脱脂奶粉或BSA皆不适合拿来Blocking
> http://www.listarfish.it/lsf/jackson/Jack_BAG_IgG.html
> 那请问各位还有什麽适合拿来Blocking
你自己给的网页上不就有：
Blocking with 5% normal serum from the host species of the secondary antibody
以你的状况来说 也就是 normal rabbit serum
> 另外我在做的是mouse tissue protein
> 有几支一抗是mouse monoclone antibody
> 但是二抗的goat anti mouse会有non-specific binding
> 换过一家的二抗也一样
> 请问有什麽方法可以将total protein内本来的mouse IgG去除掉？
用 mouse ab 抗 mouse protein 就有怪到了吧？
解决方法，用 protein A/G beads 来给你的 lysate 作 pre clean 吧
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※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: boblu.STUDENT.CWRU.Edu
1F：推 jazzdevil:我也遇到这种冏境 去哪找rabbit serum... 12/12 15:31
2F：推 dlink:问有养兔子的同学, 有不少实验室的animal model用兔子 12/12 19:38
3F：推 julyselina:问看看有哪些实验室有在做polyclonal antibodies,一般 12/13 01:33
4F：→ julyselina:都会买兔子来做 12/13 01:34