作者njp13 (.....)
看板Biotech
标题[求救] Plasmid抽出来以後 不久後却消失了？
时间Fri Nov 30 19:53:47 2007
小弟最近在进行cloning
养完菌以後 作plasmid extraction
第一次
把抽出来的plasmid直接跑胶发现band很亮 浓度应该OK
接着把抽出来的plasmid切一刀
与空vector及之前insert正确size片段但有点突变的plasmid也切一刀之後比对大小
发现size也正确
接下来的应该就是送去定序
但是到定序商手上 他们测完OD发现我送的sample浓度太低
几乎跟水没两样
我想说那就再养一次再抽一次吧
第二次
我一样先跑胶
band很亮
隔天测OD稀释20倍得到的值却只有0.0162 也就是说原始浓度只有 0.0162 μg/μl
(老实说这样的值根本不可能出现前一天那麽亮的band)
不过我想应该定序商的机器还是可以读得到
再隔一天
定序商来电 一样 又是sample浓度太低
我发现我的plasmid浓度好像会衰退
不知道实验经验丰富的各位可以帮我想想为什麽有这样的状况发生吗？
感谢感谢
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抱怨....
本身不是分生背景 硕一也不是作这方面的题目
因为老板要被fire才换老板换题目
现在硕二了 实验进度龟慢 又一直卡到阴
不是跟Novagen这种大公司买vector结果送来的一管空的eppendorf
里面什麽都没有(一只八千的eppendorf是镶金的吗？)
就是买到有问题的plasmid extraction kit
column一直破 结果才承认QC有问题 送一堆新的column补偿
现在又遇到plasmid被鬼摸走的状况
T＿T
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.217.31.18
1F：推 bluecsky:ㄟ..你抽plasmid最後回溶於什麽?TE?水? 11/30 19:59
2F：→ bluecsky:我以前遇过一种很囧的状况..我回溶的水似乎有污染 11/30 20:01
3F：→ bluecsky:结果我的plasmid都被切成碎碎的小片段..= = 11/30 20:02
4F：→ bluecsky:後来换过水就好了..还有你说跑gel很亮?..能拿张图来看吗 11/30 20:02
5F：→ bluecsky:要是真的浓度低很简单阿..多抽几管给他浓缩就好XD 11/30 20:03
6F：→ bluecsky:可是有时候把DNA送太浓给人定序反而跑的结果很糟= = 11/30 20:04
7F：→ bluecsky:此外你一次跑gel都load多少plasmid去跑? 11/30 20:05
8F：推 njp13:最後回溶在KIT附的EB, 我猜可能是EB被污染挂点了... 11/30 20:23
10F：→ njp13:不只隔天测到的OD回推的值.. 11/30 20:29
11F：推 rebirth:题外话 定序不是可以直接送plate? 11/30 20:31
12F：推 njp13:恩恩 刚刚接到电话 定序公司说不然直接给他们菌液也可以 11/30 20:32
13F：→ njp13:我不知道可以直接送菌液或plate耶..哈 真是虚 11/30 20:32
14F：→ njp13:感谢b大跟r大的意见 谢谢你们 11/30 20:34
15F：推 bluecsky:哈..说老实话这种浓度其实不算高阿XD..直接送菌液吧 11/30 20:46
16F：推 satasumi:浓度真的不够高耶,如果想要好的结果,至少要有100ng以上 11/30 20:56
17F：→ satasumi:而且.量要够才行,不然品质会很差的 11/30 20:58
18F：推 njp13:恩 测完OD 我也是抱着姑且一试的心态送去定序，没想到送到他 11/30 21:03
19F：→ njp13:们手里的时候浓度已经降到缺近於零 XD 重作继续作吧! 11/30 21:04
20F：推 bluehttp:加油 我最近也在作cloning 11/30 22:45
21F：推 meiosisLin:solution可能要换一下～～污染的可能性不小... 11/30 23:59
22F：推 wea:其实跑胶只要一点点就可以看得很清楚 12/04 16:18
23F：→ wea:OD260只有0.01多太低了 容易测不准 12/04 16:20
24F：→ wea:至於买来的vector 你确定管底真的没有透明的一小片? 12/04 16:20
25F：推 njp13:真的没有 因为後来送来新的一管是液态的...XD 我一开始也以 12/05 17:22
26F：→ njp13:为是要回溶 结果根本不是这样 因为他附了一管control也是液 12/05 17:22
27F：→ njp13:态的 根本不用回溶就可以用..所以....恩 12/05 17:23