※ 引述《JinMinHo0626 (想念我的单眼皮男孩~敏湖)》之铭言： : 我最近用Hek293细胞做实验 : 这株细胞是不是本身就很敏感? : 非常容易飘起来.... : 今天我seeding 4x10的5次方在6well盘中 : 用2ug DNA:5ul lipo做 : 刚刚4小时去看....大部分都飘起来了 : 现在头很痛~~~~ : 这株细胞transfect方面是不是有些需注意的地方？ : 例如细胞数量...lipo的使用...後续的方法 : 不知道哪位可以大约帮我解惑 : 谢谢@_@ HEK293本来就不会贴的很紧 提供一下我们家的方法 293 在 6 well中的transfection 我们大约都会让293长到8成满 所以你可以先试试看seeding不同量的细胞数 然後到隔天用显微镜看一下 找到一个差不多的 以後有可以固定用那个数目去seeding (算细胞很主观 每个人算起来都会不一样!) 按照lipo的步骤 先把medium换成没有抗生素的2ml(没记错的话!) 然後plasmid:lipo大约是1:2就可 以往我们都给它4ug plasmid: 8ul lipo (没记错的话 6 well condition中 lipo的handbook说可以最多送到4ug DNA) 後面你应该都会作 我们家都是收24 hr 就可以看到protein expression 如果要48小时收 那细胞量一开始就再低一些 免得48小时候就长满 其实用lipo很方便 只是最好先把lipo的产品说明看过 按照它的指示 多少体积下 加多少量等等 也可以自己尝试抓condition 当然不同细胞 也会有不同的条件 这种东西 只能给你一个经验谈 实验不都是一直在试条件 急不得... 如果你需要的protein不多 那当然可以改在12 well作 毕竟lipo也不便宜 细胞对lipo本来就有不同的敏感度 像是HeLa 就很容易死掉 所以在同样6 well下的条件 我们plasmid:lipo就会降到1:1 而293和HeLa都算好transfect的细胞 用lipo操作效率都可以很高的 另外要注意的是~ 293很容易因为你在换medium或是加东西时 你去冲到它 它就会飘起来 所以只要小心操作 从well边缘加进去就好 小弟在这卖丑了~ 希望对你有帮助 加油啦! --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.62.51