※ 引述《iamprada (熊宝)》之铭言： : 大大您好，最近也在做这个实验 : 过程中也碰到许多问题 有些也与您相似! : 例如:我对於固定液的使用有许多的疑虑~ : 就我所知~固定液常用的有三种 : 1. -20度C 100% MeOH : 2. acetone : 3. 4% Paraformaldehyde : 但对於要选用何种固定液实在很难抉择 : 我有试着测试1&3的方法 : 但似乎很难从染色结果中推论谁好谁坏! : 若要从显微镜下观察细胞型态 却没有太大差异 : 请问以各位大大的经验 该如何选择呢?(Paper似乎也没特定用者) : 而我想看的蛋白是细胞膜上的receptor 大大您好 对於使用methanol和PFA之间的差别 根据学长对我的说明 就是methanol除了可以fix cell之外 methanol同时也会"extracts" the soluable pool并且permeablize lipid membrane 而PFA就单纯是fix cell的作用 所以若使用PFA来固定细胞的话 就必须使用一些detergent来permeablize membrane 针对一些membrane pool的protein 学长是建议"别"使用methanol来固定细胞 因为它会wash掉部份protein 希望对你有帮助^^ : 另外好像许多人会将blocking buffer 或是抗体用PBST配置 : 但我有个顾虑是Tween-20或是tritonX-100 : 是不是会破坏我主要观察的membrane protein? : 因此我permeablizing改用0.5% saponin 抗体则配置在PBS中~ : 请问我这样的顾虑是有必要的吗~? : 麻烦各位大大指教!! --

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