作者iamprada (熊宝)
看板Biotech
标题Re: [求救] 想请教immunofluorescence的一些操作问题
时间Sun Oct 28 02:45:06 2007
大大您好,最近也在做这个实验
过程中也碰到许多问题 有些也与您相似!
例如:我对於固定液的使用有许多的疑虑~
就我所知~固定液常用的有三种
1. -20度C 100% MeOH
2. acetone
3. 4% Paraformaldehyde
但对於要选用何种固定液实在很难抉择
我有试着测试1&3的方法
但似乎很难从染色结果中推论谁好谁坏!
若要从显微镜下观察细胞型态 却没有太大差异
请问以各位大大的经验 该如何选择呢?(Paper似乎也没特定用者)
而我想看的蛋白是细胞膜上的receptor
另外好像许多人会将blocking buffer 或是抗体用PBST配置
但我有个顾虑是Tween-20或是tritonX-100
是不是会破坏我主要观察的membrane protein?
因此我permeablizing改用0.5% saponin 抗体则配置在PBS中~
请问我这样的顾虑是有必要的吗~?
麻烦各位大大指教!!
--
我是天空里的一片云 |\__/| 喵~ + /
偶尔投影在你的波心 ≡ ◎.<≡ ★ /+
你不必讶异 ╰──╯ + ★ ▲
更无须欢喜 ◢◣~ 茋 + / ▲ ▲ ▲
在转瞬间消灭了踪影 ★ ▎ ▎▕
▂▃▄▅████▇▆▅
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.177.236