※里面吃掉 methylated template 似乎也可以交给 DpnI, 如果没有特殊菌株的话... ) : 是比较建议: : 1. 确认 template 来源单一. 比如说拿来 PCR 的 template 重新画开挑 : single colony 抽 plasmid 用来做为重新 PCR 的 template. : 2. 确认实验的目的, 乌鸦不清楚你要 clone 的 gene 为什麽要重新 PCR, : 所以下面只是猜测... 如果说是因为 cutting site 的问题, 要做不一样的 : cutting site 好进行 sub cloning, 那建议可以只 PCR 前面一小段, : 然後接回去旧的 vector 後再整段剪下来去进行 sub clone... : 3. 如果排除了乌鸦上面可能的猜测, 非得整段进行 PCR 不可, : 那可以... : 3A. 重新 PCR, 重新接, 疯狂送 Sequence... : 3B. 检查之前送定序结果的东西在 mutant 附近有没有 cutting site 可以 : 进行剪接, 看看那麽多 sample 之中有没有可以用来互相弥补的. : 如果为了老板要拼业绩, 这是可以与 3A 同步进行的. : 3C. 不顾一切的去订 primer, 用 site-directed mutation 的方法一个个改回来... : 当然, 乌鸦也是比较不建议 3C 的... 我现在的想法是分段做pcr然後再接起来 毕竟越短的错误机率越低 可是还没想到要怎麽分段做 两个pcr片段可以直接接起来吗？(先变成一个大的insert)甚至多个接成长片段 再一起接到vector中 感觉起来就算可行 efficiency也超低 疯狂送 Sequence我会被砍死啦！ --

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