有人再养"Human primary macrophages" 我的实验是想利用一些多醣体刺激macrophages 测其G-CSF产生的量 了解其中可能参予的讯息传导途径 首先我的做法是 从human peripheral blood 利用Ficoll的方式 得到PBMC 方法一 毕业学长过去的做法 直接将PBMC种在6 or 12 well culture plate 大约过一到两小时左右 会有部份细胞贴附在dish上 换medium 将没有贴的细胞吸掉 剩下贴的细胞就当作Human primary macrophages 大约从分细胞开始约过七天之後 开始做实验 方法二 得到PBMC後 再利用Magnetic cell sorting(negative selection)的方式 纯化分离得到monocyte 再种在6 or 12 well culture plate 一样过一到两小时左右 换medium 将没有贴的细胞吸掉 大约从分细胞开始约过 七天之後paper称这种为monocyte-derived macrophages 方法三 比较多paper是这样做 从方法二 由PBMC得到monocyte後 再加入GM-CSF orM-CSF 等grow factor培养约七天後 一样paper称这种为monocyte-derived macrophages 我的困扰的地方在 无论我用哪种方法 都会遇到一种问题 就是刚分完细胞种下去的两三天内 细胞贴附的情况还不错 但之後 这些贴附的细胞就会不断的漂起来 等到七天後我想做实验时 有时候根本贴超少 少到根本无法做实验... 而且每个well贴的情况还不太一样 另外不同次贴的状况也都不太一样 也就是每次刺激的细胞数都不同 不容易做统计 我大约种1X10(6次方)~3X10(6次方) 不等 使用RPMI-1640,10%FBS 但奇怪的是 之前学长的做法似乎好像可以贴的很多 但问他怎麽做的 他只会说需要给细胞爱..... 而且方法一 因为直接种PBMC 就算贴的细胞内含有macrophage 或是monocyte分化成的 macrophage 难道不会有其他种细胞吗 Dendrtic cell也会贴? 怎麽样都养不好..搞了好几个月了(其实已经半年了..) 有谁有养这样细胞的经验的阿 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 220.134.20.69 ※ 编辑: ZUNDERTAKER 来自: 220.134.20.69 (10/08 22:24)