作者lchd (...)
看板Biotech
标题Re: [问题] TA cloning 相关问题?
时间Wed Oct 3 01:16:19 2007
※ 引述《borhen (希望梦想成真)》之铭言：
: 请问一下~!@@
: PCR纯化完 ==> 把A接上去 ==> 要在纯化一遍 吗? ==> TA vector ligation
: 因为发现到TA 对於我来说很难上~ 每次只有二十五颗 只有一颗是我要的
: 我想问有可能是哪些原因??
我以前做TA 做完A-tailing 之後 是没有再纯化一次的
可能能的原因我想的到的...
1.ligase出现问题...
2.ligation buffer ATP 浓度不够....(可能buffer放太久 这个我不是很确定
不过之前做 额外加入ATP有提高过效率）
3.Amp plate浓度过高...
4.Insert太长.... insert vector比例稍微调整一下看看
5.competent cell效率不好....
你可以试着改变这些条件看看
祝你成功...
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