※ 引述《Starling (:))》之铭言： : ※ 引述《gunking (枪王)》之铭言： : : 请教各位前辈有关微生物实验的无菌操作， : : 这些问题看起来似乎都很幼稚， : : 但在下原本不是学生物领域的， : : 研究室也刚要投入生物科技领域， : : 恳请各位拨冗指正下面的问题。 : : 1.物品拿进无菌操作台之前的消毒。 : : 要把灭完菌的东西(抛弃式培养皿、玻璃器皿、玻璃器皿外包着报纸、tip盒...) : : 要放到无菌操作台之前会接触空气， : : 要不要对这些物品的表面喷酒精消毒後，再放入? : 当然是喷一下比较保险 : 不过，再这边我有一个问题 : 那就是，我以前有一个中央的学长习惯是，酒精喷完後，要用擦手纸擦拭过 : 他是这样说的:如果不擦，你喷酒精就失去意义了 : 这句话我还是没有很懂，因为当年在问下去他就要发脾气了 : 所以不是很赶在菜鸟时期就去让学长发脾气 : 当然也想过自己查证，但仍无确切答案 : 刚刚好有板友要讨论，顺便再请问一下大家的经验 : 然而 : 另外也有别的学长 : 习惯是喷了酒精，然後拿进去hood中，待其於lamina flow中风乾 : 这位学长的说法就与之前的那位迥异 : 他说:不能去擦唷，你怎麽知道擦手纸一定乾净，擦了只会增加污染机会 我猜前者是酒精喷太多了!..以致於拿进去无菌操作台 过火会整个烧起来..所以先把多余的酒精擦掉.. 事实上我比较赞成後者的方式.. 然而每次在无菌操作喷酒精时， 要如何才能确认是"彻底灭菌"..这是很难界定的 因此就会有人把酒精喷一堆..慢慢让他在无菌操作台挥发 性子急一点的就把它擦拭过继续使用啦! : : 2.抛弃式培养皿的储存及使用。 : : a.灭完菌塑胶抛弃式培养皿一买来後，大家都怎麽储存的? : culture room中会有专门的空间或柜位去存放 : : b.储存时，正放、倒放有没有关系? : 应该是摆整齐注意乾净就好了吧 : : c.是不是袋子一打开，那一包就要用完? : 这个倒是没有一定耶 可以续用啊 只是会用一个夹子去封口 : : d.要放到无菌操作台前，要不要对这些物品的表面喷酒精消毒? : 还是会喷一喷 : : e.要抛弃前，是否整个含培养基一起灭菌? : 看实验室以及学校的相关规定吧，有的实验室好像还可以直接再水槽冲洗的 : 当然啦，那是内涵无感染物质的情况 : : 3.塑胶品的灭菌(autoclave)。 : : a.市售灭菌过的抛弃式塑胶培养皿及灭菌过的tip， : : 使用前需不需要再灭菌过，以确保里面无菌? : dish plate等等 应该买来就是无菌的包装 : 而tip的话，则是买大包的，然後值日生负责插tip，拿去灭菌 : : b.螺旋盖试管里面装培养基的时候，螺旋塑胶盖可以一起灭菌吗? : 其实，你说的那些tube 应该不太能受热耶 : 我们实验室的tube，plate，dish等等都是买来就无菌包装，用完就丢 : : c.有哪些塑胶品是不必或不行进行灭菌? 要如何分辨呢? : 订货时，或者目录，应该都看得到吧，不然打电话订货时问一下公司罗 : : 4.玻璃培养皿的灭菌。 : : 玻璃培养皿灭菌时，上下盖合起来，外包报纸进行灭菌， : : 这样高温蒸气有孔隙进入培养皿内部灭菌吗? : 我们灭器械时，都适用锡箔纸包，包完就拿去aotuclave : 之後放在UV里风乾 : 这样而已耶 灭容器要使温压环境能充斥容器内..才有灭菌效果 因此容器都不会紧闭的原因在这 但是灭完要取用又怕直接暴露外界..所以通常是盖着稍旋而不旋紧瓶盖 : : 5.agar培养基之灭菌。 : : 看书上写，agar用flask调好後，需要用棉塞塞住并包铝箔纸，才能灭菌。 : : 请问可否只包铝箔纸就去灭菌? : 没经验 这个可以..没有问题..但是加个棉塞比较OK (铝箔纸有裂痕就完了) : : 6.消毒用酒精浓度。 : : 看到书上写酒精浓度有70%也有75%， : : 请问大家多用那种浓度呢? : 其实，以前上微免时验时，老师曾经说过 : 7X %的酒精，效果最佳罗 : 高到8X % 或者低到 6X%就会打折了 : 所以习惯上都是用75% 当然， 70%也常用 : 应该没有太大的差别 : : 以上问题是看过几本微生物实验书之後， : : 有几个转折性的小步骤未交代(尤其塑胶品部分)， : : 才向各位前辈请教的。 : : 感谢各位，祝大家中秋快乐。 : 只是经验 : 不一定都对 : 希望大家帮忙集思广益 : 因为毕竟每一个人都经历过菜鸟的时期 : 都曾经希望能有人在自己辛苦摸索时，能给予适时的帮助 : 无关以上内文 : 既然聊起了一些进实验的基本东西 : 有些话不吐不快，顺道提一下 : 我在实验室发现，很多人都满"健忘"的 说真的..很多事情习惯之後..原因为什麽就很少人去深究了 只有自己吃过亏有深刻去研究的才会了解这种道理阿 : 等到自己熬过来後，成为实验室学长姐了，身为熟析环境的"老鸟" : 到了这一天，竟然将当年，自己曾经是新人时所有的一切艰辛给忘得一乾二净 : 不愿意带学弟妹 哈哈..这个也没有您想得这麽夸张啦.. 毕竟人有七情六慾 对一个硕班老人..这是他拼毕业的最後机会 有时候遇到个小萝卜头..爱问一堆白目问题.. 你想他会怎麽想? 敝人的经验是会告知新人该做什麽事..原因不见得说..因为 你自己也未必知道..也是前人告诉你的.... 对於原po发生的经验我也有 我反而是藉此自己去找答案..(你卢别人太久人家也会不爽) 到我要毕业时，反而是实验室其他人有疑问都找我帮忙 甚至毕业一年後还有学弟打电话求助.. 这是个给你自己学习的好机会 : 对於刚刚进实验室的summer，懵懵懂懂的问题都会显得不耐烦 : 我认为我把这种况状，看成是"健忘"，还有点美化了这种心态 : 当然不是说，要去惯坏了底下的学生，让他们失去自己研究的能力 : 但是，毕竟人家初到新环境，对於"什麽药品，什麽器材放哪边?"的问题 : 劳烦一下开个金口，应该也不是什麽难事 这个真的太扯了 : 至於实验怎麽做，能让学弟妹学的，也不应该好像很怕有人跟着看就会吃亏一样 : 或者必较恶劣的，对於较有实验室经验的学弟妹，才会比较肯理会 : 至於完全从零开始的，就完全被归类成拖油瓶 这个经验我也有.. 经验的有无最大的差别就是会不会干蠢事或危险事.. 因此之前我对有无经验的学弟妹训练方式就有差.. 没经验的要先纸上谈兵，带一次实作，让他自己做看结果OK才放行(还真像带大学部实验) 因为手续繁杂，有时候要有充裕的时间才能教 和有经验的动一动嘴巴就可以不一样..看起来或许有些落差吧 : 也许很多时候，真的无关新人的程度 : 只是有没有经历过而已 : 有些仪器的使用也没有多难 : 带人家看一次，人家就会用了 : 不要好像"吝啬"於自己的所知似的 : 一句:"你什麽都要学长教吗?" : 常常会弄得原本满心期待要好好学习的学弟妹心头阴影难消 : 实验室的成长，不应该是在这种小地方去斤斤计较的 : 实验技术与方法，大家分享，才能知道自己是否有缺失 : 搞不好自以为已经熟析得不得了的实验 : 其实也只是你这几年来不断地重复愚昧的习惯而已 : 教学相长搞不好也能给你自己不少的帮助，挑出一些症结 : 也不要过度膨胀自己会的东西，那些技术确实是你的学习心血没错 : 但，在将来学术上的漫漫长路来看，若你老是觉得这些心得很怕别人学走的话 : 其实你的格局已经被自己限制住了 : 试想，有哪位大学者是靠"暗慷"来赢别人的啊? : 况且，还是那句老话，将心比心，没有人生下来就会每一项实验的 : 就算你曾经因此而吃过苦，也不要觉得一代一代都要经历这种鸟事，才算常态 上面提的我完全同意..也因此我之前带别人作实验有时都会藉由讨论 来修改实验流程中的细节..因为这些没有"一定不变"的 : 离题了，只是有感而发 : 抱歉 -- Ｏ 　　 ∥　　_ CARBOXYL Ｈ Ｃ—Ｏ GROUP ＼ + ∣ AMINO Ｈ—Ｎ—Ｃ—Ｈ GROUP ╱ ∣ ◢██◣ █ █ █ --

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