看板Biotech
标 题restriction enzyme 把 DNA 切烂？
发信站清华生命科学 BBS (Sat Sep 22 01:23:45 2007)
转信站ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!nthuls
对不起为了标题长度限制只好打那麽耸动的鸟标题...
我想问的是，最进在切两个不同的 plasmid, 一个用 EcoR1 一个用 BamH1
不是 double digestion 喔 是各用一个 RE 切而已
两个 digestion 当然是一起作的
除了enzymes and buffers 以外从RE digestion 到沉淀回溶都用一样的材料与器材
最後跑胶的结果却发现用 BamH1 切的那个整个糊掉
变成一滩 250-100bp 之间的 smear
EcoR1 切的那个倒很成功 当然原本的 plasmid 也没什麽问题
想问问大家对此有何建议？
我 BamH1 没有用专门的 buffer
（只用 new england biolab 的二号 buffer, 就表上来说百分之百相容）
也没有加 BSA
这会是造成 nonspecific digestion 的原因吗？
--
And my soul from out that shadow that lies floating on the floor
在那地板上浮动的影子中的我的灵魂
Shall be lifted- nevermore!
将永不再起...
--The Raven by E.A.Poe
--
※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 129.22.124.232
1F：推 boyo:可能切太久了 BamHI我记得有Star Activity 放太久会开始乱切 09/22 07:19
2F：推 Crow22312:用别的东西切切看出问题的 plasmid, 如果别的东西正常, 09/22 13:17
5F：推 microball:有时候enzyme放久了会开始乱切 可以试别管 BamHI看看 09/23 19:06