※ 引述《mournermind (阿蒙)》之铭言： : 我们实验室长久以来的方法大概就是 : 1. single colony -> 养12hr以上 OD600约1.XX : 2. 以约1/10的菌液加入新鲜LB中 OD600约0.1 进行refresh : 3. 约2~3hr後 OD600 约0.5进行IPTG induce : 4. 取定点时间induced的菌看蛋白表现 : 可是我在pET mannual中所看到的方法大概是 : 1. single colony -> 养到 OD600约 0.5 : 2. 以3ml的菌液加入100ml新鲜LB中进行refresh : 3. 约2~3hr後 OD600 约0.5 ~ 1 进行IPTG induce : 4. 取定点时间induced的菌看蛋白表现 如果是我，一开始我会先试这个。你们实验室的方法你可以有问题之後再试。 （或是通通试亦可。那就一次养两瓶，一次搞定） : 以上我没误解应该是这样 : 另外 : 我问其他家专门做蛋白的同学他跟我说 : 她们家老板跟她们说菌液refresh後大概OD600要到0.8 : (反正就是快进入station phase) 个人的经验亦是如此。 我的菌株在saturation state之後再转1L LB亦表现良好… 不过我也想说，应该有可能是case by case. : 时让菌达到快最大量时再进行IPTG induce会得到较多的产物 : 我现在有点迷糊掉了 不知道板上的其他学长姐所表现蛋白的条件会是怎样?? : 另外因为我现在表现的蛋白是大部份不可溶但supernatent也表现出有产物的情况 : (SDS PAGE就可看出 不是很浓但比其他杂band强3倍以上) 依据你提供的资料，OD600nm=~ 1.0 will be better than 0.5. 不放心的话，用20mL or 50mL小量养，测试OD条件，以SDS-PAGE验证。 : 我现在已经进行25度C的养菌 可是养了22hr了LB还是很澄清ˊˋ 这样正常吗 : (我的菌 lacI represser很像锁不太紧即使不加IPTG也会表现 : 我在37度C养的这只要表现的菌也会比一般的菌长的慢点) : 另外在进行低温诱导时是否也是要在菌OD600到一定值後才加IPTG? usually.太早会导致菌很快乐，但没有你要的蛋白表现。 不过…在这边看似忽你的菌体质不太好。 如果实验室有学长姊的话，拿他们的菌试试？（competent cell） : 还是一开始就可以加了??(不好意思问这种问题 因为实验室学长姐要我自己 : try try看ˊˋ 可是我想问有经验的比较快... ...) : 以上谢谢各位学长姐啦~ 参考看看 --

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