作者McRay (Disgusting human(弹走))
看板Biotech
标题Re: [问题] 关於EMSA的基础问题-新手
时间Mon Sep 3 17:21:54 2007
※ 引述《maoneko (mao)》之铭言：
: 最近老板要做EMSA
: 用的是Pierce的Kit
: 因为完全之前没接触过
: 有些基础的问题要请教一下~~
: 1. 为何native gel 要当天现做现跑
: 不能像SDS PAGE可以前一天做好?
我的经验都是前一天晚上做，或是当天做都可以
: 2. 为何loading之前要先Pre-run?
可能是先以低电压(如10-20V)让所有的probe卡在well的底端附近
因为在低电压下probe在gel泳动率很低，所以先用低电压pre-run可能会有
类似跑SDS-PAGE双层GEL的结果。如果不PRE-RUN，我的结果也会比较糟(仅供参考)。
: 3. 为何transfer之前时，要先把membrane先泡在0.5X TBE
: 而不是transfer buffer?
: 劳烦各位解答了 谢谢~~
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