作者SECIA (优雅熟女)
看板Biotech
标题Re: [问题] 用293T制造lentivirus
时间Sun Sep 2 19:49:01 2007
恕删 我觉得你293T seeding的太少 ㄧ般我都是70%在做 无论是细胞的状况
或是後续virus titer都会好很多
: 我是用lipofectamine 2000来做293T的transfection，
: 并非使用建议的TransIT-LT1。
用哪个都可以 不过建议lipofectamine 2000 对293T不要超过3-4小时 毒性比较少
我没做过6小时 不过3小时OK 而且效率跟LT1 OVERNIGHT 差不多
: DNA total 5ug, lipofectamine 10ul，使用OPTI-MEM，约6小时後换medium
: 做完隔天看细胞都还平安无事
: 到第三天准备收virus时发现细胞已经死了好多...
: 请问这是正常的吗?还是因为liposome加了太多才死掉的?
不会太多 应该不是LIPOSOME的关系 DNA可以再多一点 效率会更好
基本上只要是liposome transfection 都可以 我想你用2000是很ok的
之後titer也不错
你可以试试看短点的时间和细胞的数目增加看看
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.230.79
1F：推 icome:OK!我试试看 感谢! 09/03 10:37
2F：推 countonme:其实lipofectamine2000说明书上是建议九分满 09/03 20:49