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标 题Re: [问题] pGEM不是应该很好接的吗~!?
发信站不良牛牧场 (Sun Aug 12 23:23:51 2007)
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※ 引述《[email protected] (&&)》之铭言：
: 我是用Promega 的 pGEM-T easy Vector system
: 我要的片段在之前已经利用上面提到东西接起来了~3k vector+1k insert
: 现在要利用PCR~来换我insert两端的切位~
: 又因为~我的template是pGEM
: 所以为了防止transform後被原来的template干扰~
: 我PCR完的产物~利用Gel-M~来做gel elution
我的经验是经过gel elute的话,PCR product两端的A可能会掉大部分
我建议gel elution的产物另作A-tailing
ligation只要在室温1小时就够了.正常来说可长100-200 colonies.
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