真巧，我最近也在处理一个 pET32 的 case 和你分享一下吧！ 1. 首先确定你的 protein 屁股上真的挂着一个 His tag? 如果是我自己做的 clone，我会在 reverse primer 上挂着 stop codon 切掉 fusion partner 後就不会两头都带有 His tag 了 2. 若真的两头都有 His tag 那麽还有一个 S tag 可以用来纯化 如果你用 thrombin 切的话，S tag 会在你的 protein 那一边 如果你用 enterokinase 切的话，S tag 就会在 fusion partner 那一边 只有购买 S protein 就可以纯化了 (目前知道 Novagen 在卖，也就是卖 pET32 的厂商啊) ※ 引述《mournermind (阿蒙)》之铭言： : 因为实在没什麽头绪想请有经验的各位提供个想法 : 我现在要的蛋白接在pET32b中 想要利用它的trx来增加我蛋白的可溶性 : 表现後的确本来几乎不可溶的蛋白(以前学姐做)变的是有部份可溶了 : 我现在想利用纯化soluable protein的方式来纯化出我要的蛋白 : 再将trx切掉得到较完整的我要的蛋白 但是由於以酵素切掉trx後 : His後所得到的proein带有His tag而被切掉的trx上也带有His tag : 所以想问有经验的学长姊们遇到这问题可以怎麽做呢? : 我应该可以如何来将这两个都带有his的蛋白分开来咧@@? : 真的是很想知道应该怎麽做 有办法的人请给我一些指点 orz --

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