作者buterscotch (##)
看板Biotech
标题Re: [求救] 植物DNA的萃取
时间Sun Jul 29 15:04:46 2007
※ 引述《dankai (改变心态...冲!)》之铭言：
: 1.你在把研磨好的植物材料放到CTAB时,可能潮解到 (我初期做实验时有发生过)
: 2.会不会你的植物材料的次级代谢物太多,遮光不足等 (像我的材料会额外加入PVPP)
: 3.水浴的时间....我是不清楚你是看paper还是前人留下来的方法...我是觉得煮太久了
我常常煮整晚，都不会怎样，应该没关系喔。
: 4.我建议你再第7步骤後再细纯化一次利用phenol与chloroform...
: 因为我觉得你这个纯化方法算是粗纯化而已...在最後的DNA中仍存在许多杂质~如蛋白质
: 5.（tip可切斜口）<-----这个步骤很危险...原本灭菌好的tip..可能切的动作污染!
可以买本来就切好的tip，也可以先切好再去灭菌罗。
: 6.你可以将RNase作用时间再延长至1个小时...让他充分作用
: 7.我想最终还是你的TE buffer是不是已经污染等等~
: 其实再第一次TE buffer溶完时,就可以先跑一次电泳...
: 如果这时候已经smear就知道之前步骤出出问题了
可以去买extract DNA用的kit来试试看，如果kit出来没问题，
就可能是纯化不完全，
如果出来有问题，可能就是处理太粗暴。
我个人比较倾向认为处理太粗暴或是磨叶子的时候没有让叶子保持低温，
所以造成DNA degradation。
:)
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◆ From: 124.187.109.124
1F：推 dankai:是喔..煮整晚~ 过去学长都叫我们不要煮太久..以免煮出乱七 07/29 15:12
2F：→ dankai:八遭的东西...其实做的出来最重要!!XDDD 大家加油~ 07/29 15:14
3F：推 buterscotch:我觉得做实验最要学的秘技之一就是：要知道哪个环节 07/30 13:53
4F：→ buterscotch:适合吃饭，哪个环节适合回家睡觉。（眺望远山） 07/30 13:54
5F：推 gracie:70%EtOH可以多洗几次 磨的过程中怕潮解的话 研钵先预冷 08/14 19:43
6F：→ gracie:在液态氮快全部挥发之前 要赶快再加入液态氮... 08/14 19:44